Мои Конспекты
Главная | Обратная связь


Автомобили
Астрономия
Биология
География
Дом и сад
Другие языки
Другое
Информатика
История
Культура
Литература
Логика
Математика
Медицина
Металлургия
Механика
Образование
Охрана труда
Педагогика
Политика
Право
Психология
Религия
Риторика
Социология
Спорт
Строительство
Технология
Туризм
Физика
Философия
Финансы
Химия
Черчение
Экология
Экономика
Электроника

Этапы изготовления гистопрепаратов и техника микроскопирования



Подготовка гистологического материала и

приготовление парафиновых срезов

 

  1. Фиксировать небольшие (0,5 х 0,5 х 1,0 см) кусочки органов в 10% водном растворе формалина (или жидкости Буэна: 15 объемов насыщенного водного раствора пикриновой кислоты + 5 объемов формалина + 1 объем ледяной уксусной кислоты) – 24 часа. (Величина кусочка не должна превышать указанную, так как фиксатор за сутки проникает на глубину не более 0,2 см. Объем фиксатора должен превышать объем кусочка в 30-50 раз).
  2. Промыть кусочки в проточной воде – 24 часа.
  3. Обезводить кусочки (и частично уплотнить) в спиртах возрастающей крепости – 700, 800, 900, 960 и 1000 (в зависимости от характера материала от 6 до 24 часов).
  4. Выдержать в ксилоле – 2 часа (в хлороформе – 24 часа) – это связано с тем, что парафин не соединяется со спиртом.
  5. Выдержать в насыщенном растворе ксилола (или хлороформа) с парафином при температуре 370 С (в термостате) – 2 часа (можно до суток), чтобы избежать большого перепада температур.
  6. Выдержать в чистом парафине (или содержащем до 5 % пчелиного воска) при температуре 56-600 С.
  7. Залить материал парафином в бумажных или металлических формочках. Охладить в воде.
  8. Вырезать кусочки и наклеить на деревянные кубики.
  9. Изготовить тонкие (5-6 мкм) срезы на микротоме (санном или роторном).
  10. Поместить срезы на предметные стекла, смазанные яичным белком с глицерином.
  11. Расправить срезы на капле дистиллированной воды при легком подогревании.
  12. Подсушить срезы в термостате при температуре 370 С.

 

Окрашивание срезов гематоксилин-эозином

 

  1. Депарафинировать в ксилоле – 2 мин.
  2. Удалить ксилол 960 спиртом – 2 мин. Затем стекло со срезами поместить в дистиллированную воду – 2 мин (можно дольше).
  3. Окрашивание: на срез нанести каплю раствора гематоксилина на 2-3 мин.
  4. Срез поместить в водопроводную воду на 5-10 мин (можно на сутки, тогда гематоксилин лучше «вызреет» и окраска будет лучше).
  5. Срез ополоснуть дистиллированной водой и нанести каплю раствора эозина – 1 мин.
  6. Сполоснуть в 2-3 порциях дистиллированной воды по 0,5-1 мин в каждой.
  7. Обезводить в двух порциях 960 спирта по 1 мин в каждом (лучше капать из капельницы).
  8. Окончательно обезводить в 1000 спирте или карболксилоле – 1 мин.
  9. Просветлить срез ксилолом – 2 мин.
  10. Заключить срез в бальзам и покрыть покровным стеклом.

После этого препарат подсушивают, чтобы бальзам затвердел. Хранят препараты в защищенном от света месте.

Помимо этого классического и наиболее широко распространенного метода существует большое количество других методов для выявления различных клеточных и тканевых структур, а также цито- и гистохимические методы.

Техника микроскопирования гистологических препаратов приведена выше.

 

Таблица 2