Приборов (фотоэлектроколориметры) или визуально. Применяются
Мои Конспекты
Главная | Обратная связь


Автомобили
Астрономия
Биология
География
Дом и сад
Другие языки
Другое
Информатика
История
Культура
Литература
Логика
Математика
Медицина
Металлургия
Механика
Образование
Охрана труда
Педагогика
Политика
Право
Психология
Религия
Риторика
Социология
Спорт
Строительство
Технология
Туризм
Физика
Философия
Финансы
Химия
Черчение
Экология
Экономика
Электроника

Приборов (фотоэлектроколориметры) или визуально. Применяются



Также автоматические анализаторы (ридеры).

При определении в ИФА антител (например, серодиагностика

ВИЧ-инфекции) на носителе фиксируют известные антигены –

Непрямой метод ИФА. Затем вносится исследуемая сыворотка. Для

выявления образовавшихся комплексов антиген + антитело вносится

Антиглобулиновая сыворотка, меченая ферментом. Обязательно

Несвязанный конъюгат трижды отмывают буфером. Затем в лунку

Вносят 0,1 мл смеси раствора субстрата и хромогена и выдерживают

Минут. В процессе инкубации пероксидаза разрушает субстрат

(Н2О2) с образованием активного кислорода, который окисляет

Хромоген. В результате хромоген меняет цвет.

Конъюгаты. Содержат иммуноглобулины, в которых

Посредством прочной химической связи присоединен фермент

(пероксидаза или фосфатаза). При этом антитела сохраняют свою

Способность взаимодействовать со специфическим антигеном, а

фермент – вступать в реакцию с субстратом и окислять хромоген. Для

Получения АТ, конъюгированных ферментом, необходимы

Высокоактивные преципитирующие сыворотки против АГ или против

Глобулинов животных или человека, из которых выделяют гамма-

Глобулиновую фракцию. Иммуноглобулины конъюгируют с

Ферментом при помощи глютаральдегида. Несвязанный фермент

Удаляют диализом или хроматографией на сефадексе. Для

Предупреждения микробной деградации в конъюгаты вносят

мертиолят до 0,01 % и хранят при 4 ºС в замороженном или

Лиофильно высушенном состоянии.

Примеры:

В настоящее время выпускают препараты пероксидазных

Конъюгатов антител для выявления антигенов стафилококков,

Пневмококков, возбудителей чумы, туберкулеза, легионеллеза, гриппа,

Парагриппа, аденовирусной инфекции и др.

Сыворотки, меченные радиоизотопами для постановки

радиоиммунного анализа (РИА)

Для этого диагностического метода используются антитела,

Меченные изотопами, и учет интенсивности излучения производится

при помощи специальных счетчиков (β- или γ-излучения). Реакции

РИА очень чувствительны, позволяют обнаружить 1–2 нг и менее

Исследуемого вещества

Этапы приготовления диагностических сывороток те же, что и

Для других реакций с меткой, но маркируются антитела изотопами

I, 51Cr, 14С, 3Н.

Моноклональные антитела (МКА)

Моноклональные антитела – это особый вид иммунных

Сывороток, отличающихся высокой специфичностью. Они

Представляют собой биохимически гомогенные молекулы антител,