Мои Конспекты
Главная | Обратная связь


Автомобили
Астрономия
Биология
География
Дом и сад
Другие языки
Другое
Информатика
История
Культура
Литература
Логика
Математика
Медицина
Металлургия
Механика
Образование
Охрана труда
Педагогика
Политика
Право
Психология
Религия
Риторика
Социология
Спорт
Строительство
Технология
Туризм
Физика
Философия
Финансы
Химия
Черчение
Экология
Экономика
Электроника

Унифицированный микрометод (модификации. Тодорова).



 

Принцип. Центрифугирование крови определенное время при постоянном числе оборотов центрифуги с после­дующим определением результата по градуиро­ванным капиллярам.

Реактивы те же.

Оборудование. 1. Центрифуга. 2. Пи­петки от аппарата Панченкова (с отрезанным верхним концом и длиной 10—11 см).

Ход определения. В обработанную антикоагулянтом и высохшую пипетку набирают кровь из пальца (или венозную) до верхней мет­ки (100 делений). Пипетку укупоривают, обтя­гивая ее резиновым кольцом, и центрифугируют 30—40 мин при 3000 об/мин. Результат отме­чают по градуировке капилляра, вычитая из 100 высоту столбика эритроцитов.

Нормальные величины. У здоро­вых гематокрит венозной и капиллярной крови равен 40—48 % (или 0,40—0,48) для мужчин и 36—42 % (или 0,36—0,42) для женщин.

Клиническое значение. Показа­тель широко используют для суждения о степени анемии, при которой, как правило, отмечается его снижение, иногда до значительных цифр (20—25 %). Выраженное повышение (55—65 %) характерно для эритремии, менее резкое увели­чение (50—55 %) наблюдается при симптома­тических эритроцитозах, сопутствующих вро­жденным порокам сердца, легочной недостаточ­ности, некоторым гемоглобинопатиям. Показа­тель гематокрита дает представление о гемокон-центрационных сдвигах, он снижается при гемодилюции. Используют гематокрит для расчетных показателей, отражающих различные характе­ристики эритроцитов: средний объем, средняя концентрация гемоглобина , а также для ряда биохимических показателей.

 

3.4 Осмотическая резистентность

Осмотическая резистентность (стойкость)- это устойчивость эритроцитов по отношению к гипотоническим растворам солей. В растворе с осмотическим давлением, равным осмотическому давлению крови, эритроциты не изменяются. Изотоническим раствором является раствор хлорида натрия в концентрации 0,85-0,9% . При перемещении эритроцитов в раствор с меньшей концентрации - гипотонический раствор, они набухают и гемолизируются. В гипертоническом растворе эритроциты сморщиваются , т. к вода из их выходит в раствор с большим осмотическим давлением. На этих свойствах эритроцитов основано определение их осмотической резистентности. Степень гемолиза их измеряется в гипотонических растворах хлорида натрия определенной концентрации.

3.4.1Унифицированный метод определения осмотической резистентности эритроцитов в модификации Идельсона

Принцип: Количественное определение степени гемолиза эритроцитов в за буферных гипотонических растворах хлорида натрия.

Реактив: основной раствор (27,31 г двузамещенного фосфата натрия Na;HPO<, 4,86 г однозамещенного фос­фата натрия NaH2P04-2H20, 180 г хлорида натрия в 2 л дистиллированной воды); РН раствора 7,4.

По своей осмотической концентрации основной ра­створ соответствует 10% раствору хлорида натрия. Его разводят в 10 раз, получая рабочий раствор, осмотическая концентрация которого соответствует 1% раствору хлори­да натрия. Из рабочего раствора готовят разведения хлорида натрия следующих концентраций: 0,85; 0,75; 0,70; 0,65: 0,60; 0,55; 0,50; 0,45; 0,40; 0,35; 0,30; 0,20 и 0,10%. Можно готовить сразу по 100 мл этих растворов и хранить течение 2 нед в холодильнике.

Ход определения. В 2 стерильные пробирки, со­держащие по 2 капли гепарина, берут по 1,5 мл крови. 1-ю пробирку помещают на сутки в термостат, 2-ю — используют в день взятия крови.

В 14 центрифужных пробирок разливают по 5,0 мл приготовленных растворов с последовательно понижа­вшейся концентрацией. В 1-ю пробирку помещают 5,0 мл рабочего раствора с концентрацией 1%. В каждую пробир­ку прибавляют по 0,02 мл гепаринизированной крови, перемешивают и оставляют на 30 мин при комнатной температуре (20° С). Центрифугируют при 2000 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость из каждой про­бирки сливают в чистую пробирку с соответствующим номером.

Фотометрируют на ФЭКе при длине волны 500—560 нм ( зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм против в холостой пробы.

Холостая проба – надосадочная жидкость в пробирке, содержащей 1 % раствор хлорида натрия.

Расчет. За 100% гемолиз принимают гемолиз в пробирке, содержащей 0,1 % раствор хлорида натрия. Вычисляют процент гемолиза в каждой пробирке, сравнивая величины экстинкции надосадочной жидкости с экстинкцией, при­нятой за 100 %, по формуле:

Ех х 100

Е1

 

где Е1) — экстинкция надосадочной жидкости в пробирке с 0,1 % раствором хлорида натрия; Ех — экстинкция исследуемой пробы; 100 — про­цент гемолиза в пробирке с 0,1 % раствором хло­рида натрия.

На следующий день повторяют исследование с кровью, инкубированной 24 ч при 37 °С.

Нормальные величины. У здоро­вых в свежей крови начало гемолиза отмечают при концентрации хлорида натрия 0,48—0,46%, а полный гемолиз — при 0,34—0,32% растворе хлорида натрия.

Клиническое значение. Исследо­вание проводят при подозрении на гемолити­ческую анемию. Понижение осмотической ре­зистентности, т. е. появление гемолиза эритроци­тов при более высокой, чем в норме, концентра­ции хлорида натрия (0,70—0,75 %), наблюда­ется при наследственном микросфероцитозе и некоторых наследственных несфероцитарных ге­молитических анемиях, а также иногда при ауто­иммунной гемолитической анемии. В ряде случа­ев понижение осмотической резистентности вы­является только при исследовании инкубирован­ной крови. Повышение осмотической резистент­ности характерно для талассемии.




Поиск по сайту:







©2015-2020 mykonspekts.ru Все права принадлежат авторам размещенных материалов.