Фиксировать небольшие (0,5 х 0,5 х 1,0 см) кусочки органов в 10% водном растворе формалина (или жидкости Буэна: 15 объемов насыщенного водного раствора пикриновой кислоты + 5 объемов формалина + 1 объем ледяной уксусной кислоты) – 24 часа. (Величина кусочка не должна превышать указанную, так как фиксатор за сутки проникает на глубину не более 0,2 см. Объем фиксатора должен превышать объем кусочка в 30-50 раз).
Промыть кусочки в проточной воде – 24 часа.
Обезводить кусочки (и частично уплотнить) в спиртах возрастающей крепости – 700, 800, 900, 960 и 1000 (в зависимости от характера материала от 6 до 24 часов).
Выдержать в ксилоле – 2 часа (в хлороформе – 24 часа) – это связано с тем, что парафин не соединяется со спиртом.
Выдержать в насыщенном растворе ксилола (или хлороформа) с парафином при температуре 370 С (в термостате) – 2 часа (можно до суток), чтобы избежать большого перепада температур.
Выдержать в чистом парафине (или содержащем до 5 % пчелиного воска) при температуре 56-600 С.
Залить материал парафином в бумажных или металлических формочках. Охладить в воде.
Вырезать кусочки и наклеить на деревянные кубики.
Изготовить тонкие (5-6 мкм) срезы на микротоме (санном или роторном).
Поместить срезы на предметные стекла, смазанные яичным белком с глицерином.
Расправить срезы на капле дистиллированной воды при легком подогревании.
Подсушить срезы в термостате при температуре 370 С.
Окрашивание срезов гематоксилин-эозином
Депарафинировать в ксилоле – 2 мин.
Удалить ксилол 960 спиртом – 2 мин. Затем стекло со срезами поместить в дистиллированную воду – 2 мин (можно дольше).
Окрашивание: на срез нанести каплю раствора гематоксилина на 2-3 мин.
Срез поместить в водопроводную воду на 5-10 мин (можно на сутки, тогда гематоксилин лучше «вызреет» и окраска будет лучше).
Срез ополоснуть дистиллированной водой и нанести каплю раствора эозина – 1 мин.
Сполоснуть в 2-3 порциях дистиллированной воды по 0,5-1 мин в каждой.
Обезводить в двух порциях 960 спирта по 1 мин в каждом (лучше капать из капельницы).
Окончательно обезводить в 1000 спирте или карболксилоле – 1 мин.
Просветлить срез ксилолом – 2 мин.
Заключить срез в бальзам и покрыть покровным стеклом.
После этого препарат подсушивают, чтобы бальзам затвердел. Хранят препараты в защищенном от света месте.
Помимо этого классического и наиболее широко распространенного метода существует большое количество других методов для выявления различных клеточных и тканевых структур, а также цито- и гистохимические методы.
Техника микроскопирования гистологических препаратов приведена выше.
