Мои Конспекты
Главная | Обратная связь

...

Автомобили
Астрономия
Биология
География
Дом и сад
Другие языки
Другое
Информатика
История
Культура
Литература
Логика
Математика
Медицина
Металлургия
Механика
Образование
Охрана труда
Педагогика
Политика
Право
Психология
Религия
Риторика
Социология
Спорт
Строительство
Технология
Туризм
Физика
Философия
Финансы
Химия
Черчение
Экология
Экономика
Электроника

Справочные и теоретические материалы





Помощь в ✍️ написании работы
Поможем с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой

Культивирование анаэробов требует специальных условий, т.к. эти микробы необходимо лишить доступа свободного кислорода. В питательные среды, используемые для посева анаэробов, добавляют вещества, которые поглощают кислород из среды и снижают его концентрацию: глюкозу 1–2%, аскорбиновую кислоту – 0,08%. Все питательные среды перед посевом регенерируют, т.е. кипятят на водяной бане не менее 15 минут и быстро охлаждают, удаляя, таким образом, воздух, содержащийся в среде. Среду после посева заливают слоем вазелинового или парафинового масла, чтобы предупредить доступ кислорода. Культивируют анаэробы в бескислородных условиях. Существует несколько способов удаления кислорода: механический, химический, биологический.

Механический способ

а) Удаление воздуха механическим путем. Удаление воздуха (а, следовательно, и кислорода) проводят в специальных приборах – анаэростатах путем выкачивания. Этот прибор может быть заменен эксикатором.

б) Механическая защита от кислорода воздуха. Делают посев по методу Вейон-Виньяля в пастеровских пипетках. Для посева в чашках делают посев по методу Перетца. Для этого разводят исследуемый материал в расплавленном агаре, выливают в чашки Петри, на дно которых положены на стеклянные палочки или спички стерильные стеклянные пластинки. Между дном чашки и стеклянной пластинкой образуется капиллярная полость, куда расплавленный агар быстро затекает. Высота слоя агара под стеклом 1–2 мм, в этом слое вырастают анаэробы, в то время как над стеклом растут аэробы.

в) Замена воздуха индифферентным газом. В этом случае в анаэростат, после откачивания воздуха, нагнетают азот или, присоединив анаэростат к аппарату Киппа, вытесняют воздух с кислородом образующимся водородом.

г) Наиболее простой способ – посев уколом в высокий столбик сахарного агара.

Химический способ

Основан на способности некоторых веществ (щелочной раствор пирогаллола, гидросульфит натрия), поглощать кислород из воздуха. Засеянные чашки, или пробирки помещаю в специальные аппараты: Аристовского, Омелянского или микроанаэростат, эксикатор, туда же помещают погло­щающие вещества в чашке Петри, аппарат плотно закрывают.

Биологический способ

Основан на совместном выращивании в чашке анаэробов и аэробов – метод Фортнера. После посева чашки закрывают, заливают парафином для герметичности. Выросшие аэробы используют кислород и создают бескис­лородные условия для роста анаэробов.

В некоторых случаях, когда не требуется низкого парциального давления кислорода, кислород из воздуха можно удалить, поместив в эксикатор горящую свечу.

Среды и аппаратура для культивирования анаэробов

Среда Китта-Тароцци – представляет собой питательный бульон с 0,5% глюкозы, в который погружены кусочки печени или мяса. Перед посевом среду кипятят 20 мин., быстро остужают до 45°С и засевают сразу же, после посева в пробирку на поверхность среды наливают стерильное вазелиновое масло, чтобы защитить посев от кислорода.

Анаэростат – прибор, служащий для создания и поддержания ста­бильно анаэробных условий. Промышленность изготовляет микроанаэростаты и макроанаэростаты.

Микроанаэростат – представляет собой толстостенный металличес­кий стакан цилиндрической формы, который через вакуумную резиновую прокладку закрывают металлической крышкой. Но крышке расположены вакуумметр и патрубок для откачивания и нагнетания воздуха и газа. Крышку прижимают к краям стакана винтом с дугообразным хомутом.

Макроанаэростат – это водяной термостат, внутри которого вмонтирован анаэростат – толстостенный металлический котел цилиндрической формы, герметически закрывающийся крышкой со стеклом для наблюдения за ростом микробов. На верхней стенке анаэростата находятся вакуумметр и патрубок для откачивания воздуха. Рабочая камера имеет съемные полочки для чашек и пробирок. В макроанаэростате вакуум должен быть доведен до 3–10 мм ртутного столба.

Эксикатор – стеклянный толстостенный сосуд, закрывающийся крышкой, которую можно притереть к краям эксикатора. В крышке имеется патрубок с краном для откачивания или нагнетания воздуха.

Посев по Фортнеру. Кровяной питательный агар разливают в чашки Петри толстым слоем, после застывания по диаметру агар вырезают в виде узкой щели. На одну половину чашки засевают культуру аэробного микроба, жадно поглощающего кислород (кишечную палочку, чудесную палочку), а на другую половину засевают исследуемый материал. Чашку закрывают, заливают парафином. Аэробные бактерии быстро используют кислород воздуха в герметически закрытой чашке, затем начинают размножаться анаэробы, через 24–48 часов чашку открывают и из отдельных колоний анаэробов выделяют чистую культуру.

Посев по Вейон-Виньялю в пастеровских пипетках. Пастеровские пипетки представляют собой длинные трубки (20–25 см) диаметром около 5 мм, приготовленные из легкоплавкого стекла. Один конец пипетки открыт, а другой вытянут в виде капилляра и запаян. Перед стерилизацией в широкий конец вставляют вату. Исследуемый материал разводят полужидким агаром с небольшим содержание глюкозы, затем из каждого разведения насасывают агар в стерильную пастеровскую пипетку, предварительно обломив запаянный конец капилляра, и избегая попадания пузырьков воздуха. Затем капилляр запаивают и пипетки помещают в термостат. Через 24–48 часов в среде можно обнаружить ясно видимые колонии бактерий в виде пушинок, комочков ваты, зерен чечевицы и т.д. Нужные колонии можно извлечь, распилив трубку.

Выделение чистых культур анаэробных бактерий

1 этап. Накопление материала.

Исследуемый материал, предварительно прогретый в течение 15 мин. при 80°С для уничтожения вегетативной флоры (споры анаэробов при этом не гибнут), засевают на среду Кита-Тароцци и ставят в термостат.

2 этап. Выделение чистой культуры.

После суточного инкубирования в результате роста микробов среда мутнеет, иногда в ней видны пузырьки газа. Выделение культуры проводят или по методу Цейсслера или по методу Вейнберга.

Метод Цейсслера. Каплю материала со среды Китта-Троцц помещают в чашку с кровяным сахарным агаром, тщательно распределяют его по поверхности среды шпателем, затем этим же шпателем делают посев во второй и третьей чашке. Сутки инкубируют чашки в термостате в анаэробных условиях. На следующий день по форме колоний и морфологии микробов, изученной в мазках, окрашенных по Граму, ориентировочно определяют вид бактерий, изученные колонии пересевают на среду Кита-Тароцци для выделения чистой культуры и точного определения видов микроорганизмов.

Метод Вейнберга. 1–2 капли материала со среды Кита-Тароцци вносят в пробирку с МПБ для разведения. Затем пастеровской пипеткой с запаянным концом переносят материал последовательно в 3–5 узких пробирок с сахарным МПА, предварительно расплавленным и прокипяченным в течение 20 мин и остуженным до 50°С, погружая капилляр пипетки в расплавленный агар до дна пробирки. Засеянные пробирки быстро охлаждают под струей холодной воды, при этом агар застынет и зафиксирует разобщенное положение отдельных микробных клеток. Инкубируют в анаэробных условиях. Через сутки отбирают колонии, на уровне колонии пробирку распиливают, колонию отсасывают пипеткой и переносят в среду Китта-Тароцци для накопления и идентификации.

В результате самостоятельной работы студент должен знать:

1. Методы выделения чистых культур анаэробных микроорганизмов и их идентификации

2. Методы культивирования культур анаэробных микроорганизмов

Уметь:

1. Читать результаты микробиологического исследования

ЗАНЯТИЕ 10

 

ТЕМА. Распространенность микробов в природе. Микрофлора воды. Микрофлора воздуха. Понятие о микробном числе, титре, индексе.

 

Доверь свою работу ✍️ кандидату наук!
Поможем с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой



Поиск по сайту:







©2015-2020 mykonspekts.ru Все права принадлежат авторам размещенных материалов.